1. 泰国进口南美白对虾
我们应用PCR技术,放大EHP的18SrRNA基因,再用标记地可辛的探针探测原位杂交细胞中被感染的EHP,最后开发新的PCR技术探测对虾组织,排泄物和水中的EHP。
2.材料和方法
2.1对虾
2006年在文莱收集了感染对虾肠孢子虫(EHP)的南美兰对虾。2014年和2015年在越南虾塘里收集了感染EHP的南美白对虾。2014年,从泰国运送了一批南美兰对虾到我们亚利桑那大学的实验室进行隔离检测,这些对虾后来被检测出感染了EHP,它们的肝胰腺,排泄物和水进行了PCR技术取样检测。
为了检测原位杂交(ISH),并通过PCR技术分析EHP的特异性,研究人员使用了具有棉虾病临床症状的斑节对虾样本,这些对虾来自2005年(固定组织)和2006年(冰冻组织)的马达加斯加。还使用了感染了鳄组织变形虫的南美白对虾,这些虾是在2014年收集到的。通过PCR技术分析,肝胰腺组织或者整只对虾被保护在95%的酒精当中或被风干后送往我们实验室。通过原位杂交技术,用戴维森固定法将虾固定。
2.2.DNA提取
从感染EHP的对虾中去除肝胰腺,(4-5只虾)放进一个样本中。装运感染EHP的对虾的虾槽中对排泄物和水进行了取样。利用MicrosepAdvance离心装置(PALL公司)将虾槽里的水浓缩150倍,用于DNA提取。用一种高纯度DNA模板制备工具(RocheBioscience)或Maxwell-16Cell LEV DNA纯化试剂盒(Promega)。
为了测试EHP引物的特异性,PCR扩增检测两种寄生虫病中的DNA:
(1)棉虾病,2006年从马达加斯加收集了斑节对虾,这些虾的肌肉变白,通过rRNA基因测序,发现它们的DNA呈阴性,因为内有类似于匹里虫的微孢子虫(GenBankkp825331号);
(2)变形虫病,这些南美白对虾大量死亡,通过组织学检查,最后发现这些虾感染了变形虫(种类不确定)。
为了保证EHP引物没有宿主基因组的反应,制备DNA模板:
(1)来自美国夏威夷的无特定病原(SPF)的南美白对虾(>10样本)、斑节对虾(3个样本);
(2)来自沙特阿拉伯的印度对虾(2个样本);
(3)在新喀里多尼亚养殖的南美兰对虾(2个样本);
(4)来自菲律宾的罗氏沼虾(2个样本);
(5)沙特阿拉伯附近虾塘里采集的蟹(7个样本,未知的物种);
(6)多毛类(3个样本),卤虫生物量(9个样本),鱿鱼(2个样本),磷虾(2个样本),这些是从各种商业供应商运送。
2.3.18S rRNA基因扩增和克隆
PCR检测技术,使用了PuReTaqReady-To-Go珠(GE医疗)。扩增18SrRNA基因的引物18S-F(5’-CACCAGGTTGATTCTGCCTGA)和18S-R(5’-TCTGAAATAGTACGGGCGG)。PCR反应中包含200微米dNTP,0.2微米引物,10mM Tris-HCl(pH9.0),50毫米氯化钾,1.5毫米氯化镁,2.5U Taq DNA聚合酶和1微升提取的DNA(10纳克至100纳克每微升)。放大进行下列循环参数:到达94°C进行初始化3分钟,然后94°C温度下进行30秒,55°C温度下进行30秒,72°C温度下进行1分钟,做35个此循环周期,并在最后一个周期停留在72°C温度下5分钟。在一个含有溴化乙锭的1.2%琼脂糖凝胶中电泳分析PCR产物。在?1KB一带切除和提取DNA,克隆到pGEM-T-easy载体(Promega)上,命名为克隆pEHP-1。通过DNA测序,克隆的插入为1146bp(GenBankNo.kp759285)。国家生物技术信息中心(NCBI)使用BLAST序列数据库对GenBank的相似序列进行了搜索。
2.4、探针标记和原位杂交
克隆pEHP-1质粒DNA被用来做成原位杂交时的一个探针。Mari等人描述,在PCR反应中,使用了digoxigenin-11-dutp(Roche)标记的基因探针(1998)。用于标记反应的引物EHP-F(5’-GGGAACGACGAACGGCTCAG)和EHP-R1(5’-TGCCTTGATGAGACACTGTT)产生一个1.1 kb的片段。digoxigenin标记的DNA探针,用乙醇沉淀,悬浮在水中,并存储在-20°C。棉虾病,感染了类似于匹里虫的微孢子虫的探针如微孢子虫,是从一个克隆的16SRNA基因区域产生。
戴维森的AFA固定虾进行了处理,石蜡包埋,按照标准方法切片(4微米厚)(莱特纳,1996)。经过脱蜡,水化,蛋白酶K消化,和后固定,切片浸泡在用500微升的杂交液中(4×SSC,50%甲酰胺,1×登哈特的溶液,5%硫酸葡聚糖,0.5微克/毫升鲑鱼精DNA),这种杂交液中含有EHP探针含(0.2μg/ml)。切片放在90°C加热表面上10min,然后在42°C温度下进行一夜的杂交。最终采用硝基蓝四氮唑,5-溴-4-磷酸进行检测抗地高辛抗体共轭碱性磷酸酶(罗氏)。
2.5.EHP的PCR检测。
PCR检测技术,使用了PuReTaqReady-To-Go珠(GE医疗)。探测EHP的引物是EHP-510F(5’-GCCTGAGAGATGGCTCCCACGT)和EHP-510R(5’-GCGTACTATCCCCAGAGCCCGA)。放大进行下列循环参数:到达94°C进行初始化3分钟,然后94°C温度下进行30秒,60°C温度下进行30秒,72°C温度下进行30秒,做35个此循环周期,并在最后一个周期停留在72°C温度下5分钟。
3.结论与讨论
3.1临床症状与EHP感染史
目前,养殖对虾过程中所发生的EHP感染还没有特定的的临床症状。EHP感染通常与发育不良和死亡率上升有关。根据越南境内的鱼塘数据(虾农个人提供的数据):把感染后的虾苗放入虾塘后的前25天时间内,对虾生长速度正常,之后,对虾的健康状况开始恶化;受感染的对虾饲料进食量减少(50-70%),肝胰脏变色。对虾受到感染之后,其体型(即重量,每周进行一次称重)仅为健康对虾的10-40%。对虾EHP感染死亡率并非一成不变,根据养殖场统计,对虾每天的死亡率约为1?2%。在实验室测定过程中,对虾EHP死亡率并无显著上升,(Tangprasittipap,2013),由于测定持续周期较短(7天),有可能无法检测出死亡率的大幅变化。情况较为严重的EHP感染可能会增加其他细菌感染的易感性。我们发现,在某些情况下,EHP通常伴有弧菌机会性感染(也称为感染性肝胰腺坏死),这可能会导致增加对虾死亡率。
2. 泰国南美白对虾是海虾吗
泰国罗氏虾,亦称白脚虾、马来西亚大虾、金钱虾、万氏对虾等,是一种大型淡水经济虾类 , 营养丰富,素有淡水虾王之称,是城市居民的常见食物。
罗氏虾原产地集中在厄瓜多尔沿岸,是目前世界上养殖量最高的三大虾种之一。
其壳薄体肥,肉质鲜嫩,味道鲜美,营养丰富,除富有一般淡水虾类的风味之外,成熟的罗氏沼虾头胸甲内充满了生殖腺,具有近似于蟹黄的特殊鲜美之味。
3. 泰国进口南美白对虾还能吃吗
水产上的应用: 1【促生长作用】 牛至油所含的香味化合物等具有独特的芳香味、甜味,添加在饲料中,有利于增强鱼,虾的喜食程度,提高进食量,往往具有较好的促生长作用。这种提高,一方面表现为提高了鱼类的生长性能;另一方面降低了饲料的饵料系数,从而节约了养殖成本,提高了养殖的经济效益。Baydar等在虹鳞饵料中添加一定量的牛至油进行投喂,结果表明,试验组鱼的生长率比对照组提高19.63%,饵料系数降低3.42%,吴强强(2010)等将牛至油以不同浓度的剂量添加到基础饲料中饲喂建鲤,结果表明牛至油添加组建鲤的增重率分别提高6.1%、7.4%,饲料系数降低5%、5.1%。泰国Kasetsart大学的Jintasatapom在饲料中添加牛至油后对杂交舱的促生长效果进行了研究。结果表明喷洒有0.05%牛至油饲料的试验组,与空白组相比有10%的增重。Ching在南美白对虾饲料中添加牛至油,结果显示试验组对虾个体均重较对照组提高10%,试验组的收虾时间还比对照组提前2天。在降低饵料系数、提高生长率方面均表现出优良效果,说明了牛至油具有较为明显的促生长作用。
4. 印度南美白对虾
我一般都是买30/40的。肉质和20/30的差不多,还便宜一些,性价比更高。
浮水虾相对浮游虾,个头更大更强壮,其身体颜色较深,虾体枝节也更大。
常见的浮水虾有南美白对虾、中国对虾、印度对虾等,常见的浮游虾有青虾、红鳌螯虾、海南沼虾等。
由于浮水虾养殖成本比浮游虾更高,且其质量与品质也高于浮游虾,因此市面售价比浮游虾更高。
5. 泰国进口南美白对虾价格
泰国有一种大虾,总能吸引到吃货围观。一只虾就有成年男性的一只手臂那么长,又肥又大,透过虾壳还能看到里面饱满的虾膏。泰国人总喜欢把这种大虾放到烤架上烤熟,刷上一层酱,吃起来满口虾肉,满足感非常强。
罗氏沼虾,俗称淡水长臂虾、罗氏虾、泰国虾。原产于太平洋热带地区和印度洋,也就是东南亚地区。生活在淡水水域,因此是淡水虾,在泰国的摊位上,你常能看到罗氏沼虾的身影。
它最大的特征是有一对漂亮的蓝色步足,由于这种虾的步足会随着生长不断变化颜色,从半透明慢慢转化为橙色,最终变成蓝色,所以只要看到虾的大鳌是蓝色的,说明虾已经成年。
罗氏沼虾的体型可以生长得非常很大,这也使得虾肉饱满,虾膏肥美,因此受到不少吃货的欢迎。作为体型最大的淡水虾之一,罗氏沼虾最适合拿来焗烤和烧烤,保留虾壳烧熟,然后用叉子或筷子取出里面的虾肉。
6. 泰国养殖南美白对虾
中文名称:罗氏沼虾中文俗称:淡水长臂大虾
7. 进口南美白对虾价格
主要是诸多原因造成的
1.天气冷热
通常来说,天气越冷,对虾的价格就越贵;相反,天气越热,对虾的价格就越便宜。因为天冷,环境不适宜对虾的生长,对虾的存活相对比较困难,所以价格会高一些;相反,如果天热的话,对虾的数量会比较多一些,价格也会便宜些。这就是夏天对虾价格比冬天便宜的原因。
2.品种
不同品种的对虾,价格是不一样的。通常,进口对虾会比国产的要贵,比如南美白对虾的价格会比国产对虾价格要高一点。然后进口对虾也不是一个价的,主要还是看产地,如南美白对虾与日本对虾的价格在一般情况下是不一样的。
3.虾的大小
一般来说,大的虾价格会偏高一些,但千万不要有侥幸心理,不要天真地以为买了一袋大的对虾就是捡到宝了,可以多吃点虾肉了,有这种想法是不行的。这个有时候是不一定的,为什么这么说呢?因为个头越大的虾,质量有时不一定好,买的时候还是要擦亮眼睛看一下的。别到时候回家发现质量不行,晚了,不能退了。
4.新鲜程度
新鲜的虾会比一些奄奄一息、已经死去的虾价格要高。说起这个,再次提醒,买的时候还是仔细检查一下吧,眼睛要擦亮了!有一些小贩坏得很,会把一些奄奄一息或者已经死去的虾当成活的卖,只想因为多赚一点。这种事情不是没有,是有的,还上过新闻,所以买的时候走心点,多留个心眼是好的,不要问小贩“这些虾新鲜吗”,人家都会回答“这你可放心,新鲜的”,眼睛是长在你自己身上的,你还是要检查一下的,不要听到“新鲜”两字,闭着眼睛,就往袋子里装,这样是万万不可的
8. 泰国进口南美白对虾是淡水虾还是海水虾
罗氏沼虾(学名:Macrobrachium rosenbergii,别名:淡水长臂大虾、泰国虾、马来西亚大虾),十足目长臂虾科沼虾属动物,属于《世界自然保护联盟濒危物种红色名录》2012年无危物种。该类动物原产于孟加拉国、泰国、柬埔寨、中国、印度、印度尼西亚(贾瓦)等地区。
9. 南美白对虾是进口虾吗
北美对虾 虾属节肢动物甲壳类,种类很多,包括青虾、河虾、草虾、小龙虾、对虾(南美白对虾,南美蓝对虾)、明虾、基围虾、琵琶虾、龙虾等。其中对虾是我国特产,因个大出售时常成对出售而得名对虾。对虾生活在暖海里,夏秋两季能够在渤海湾生活和繁殖,冬季虾要长途迁移到黄海南部海底水温较高的水域去避寒。冬季虾的活动能力很差,也不捕食。每年3月分散在各地的虾开始集中,成群结队地向北方游。
经两个月的旅行到达渤海近岸浅海,开始了它们的繁殖,雌虾经过长途旅行已疲惫不堪,产完卵后大部分就死去了,只有体力较强的才能继续生存,刚孵出的小虾身体结构要发生很多变化,经过20多次蜕皮才长为成虾。
雄虾当年成熟,雌虾要到第二年才成熟。虾有两倍于身体长的细长触须,用来感知周围的水体情况,胸部强大的肌肉有利于长途洄游。
腹部的尾扇可用来控制身体的平衡,也可以反弹后退。